Sera of Chagasic patients react with antigens from the tomato parasite Phytomonas serpens

The genus Phytomonas comprises trypanosomatids that can parasitize a broad range of plant species. These fagellates can cause diseases in some plant families with a wide geographic distribution, which can result in great economic losses. We have demonstrated previously that Phytomonas serpens 15T, a tomato trypanosomatid, shares antigens with Trypanosoma cruzi, the agent of human Chagas disease. Herein, two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry (MS) were used to identify proteins of P. serpens 15T that are recognized by sera from patients with Chagas disease. After 2D-electrophoresis of whole-cell lysates, 31 peptides were selected and analyzed by tandem mass spectrometry. Twenty-eight polypeptides were identifed, resulting in 22 different putative proteins. The identifed proteins were classifed into 8 groups according to biological process, most of which were clustered into a cellular metabolic process category. These results generated a collection of proteins that can provide a starting point to obtain insights into antigenic cross reactivity among trypanosomatids and to explore P. serpens antigens as candidates for vaccine and immunologic diagnosis studies.

Diterpenoids from Azorella compacta (Umbelliferae) active on Trypanosoma cruzi

The anti-Trypanosoma cruzi activity of natural products isolated from Azorella compacta was evaluated, with particular emphasis on their effect against intracellular amastigotes. Five diterpenoids from A. compacta derived from mulinane and azorellane were isolated and identified. Only two products, named azorellanol (Y-2) and mulin-11,3-dien-20-oic acid (Y-5), showed trypanocidal activity against all stages of T. cruzi including intracellular amastigotes. At 10 æM, these compounds displayed a strong lytic activity. It ranged from 88.4 ± 0.6 to 99.0 ± 1 percent for all strains and stages evaluate, with an IC50 /18 h values of 20-84 æM and 41-87 æM, respectively. The development of intracellular amastigotes was also inhibited by nearly 60 percent at 25 æM. The trypanocidal molecules Y-2 and Y-5 did show different degrees of cytotoxicity depending on the cell line tested, with an IC50 /24 h ranging from 33.2 to 161.2 æM. We evaluated the effect of diterpenoids against intracellular T. cruzi forms by immunofluorescent identification of a specific membrane molecular marker (Ssp-4 antigen) of the T. cruzi amastigote forms. The accuracy and reproducibility of the measurements were found to be outstanding when examined by confocal microscopy

Mapeamento de domínios funcionais da molécula de surperfície GP82 de formas metacíclicas de Trypanosoma cruzi / Mapping of the functional domains of Trypanosoma cruzi metacyclic stage surface protein molecule GP82

A glicoproteína de superfície gp82, expressa nas formas netacíclicas de Trypanosoma cruzi, tem sido implicada no processo de invasão celular. Neste trabalho, caracterizamos o sítio de adesão da gp82 à célula hospedeira usando proteínas recombinantes e peptídeos sintéticos baseados na gp82. A proteína recombinante Del-4/8, em que 65 aminoácidos do domínio central da gp82 foram deletados (posições 257 a 321), virtualmente perdeu a capacidade de se ligar à célula e de inibir a invasão do parasita, em contraste com J18, o construção que contém a seqüência completa da gp82 (aminoácidos 1 a 516). Construções com deleções menores, por exemplo, Del-4 (posição 257 a 271) e Del-8 (posição 293 a 321), ligam-se à célula hospedeira em grau menor do que Jl8. Os sitíos deletados nas proteínas recombinantes Del-4 e Del-8 contêm aminoácidos ácidos críticos para adesão celular. Assim, a capacidade de ligar-se à célula da proteína Del-E/D, sem os pares de ácido glutâmico (259/260) e de ácido aspártico (303/304), foi mínima, assim como a sua capacidade de inibir a internalização do parasita. De um conjunto de peptídeos sintéticos cobrindo o domínio central da gp82, um peptídeo híbrido de 22 resíduos, p4/8, formado por duas seqüências de não contíguas (osições 257 a 273 e 302 a 306) e que contém os quatro resíduos acidicos, competiu com a ligação da proteína Jl8 à célula hospedeira e inibiu significativamente (60 por cento) a penetração de parasitas. Este peptídeo, gerado por justaposição de seqüências que estão separadas por uma seqüência hidrofóbíca na molécula linear, parece estar mimetizando o sítio de ligação na célula da gp82 que seria conformaação dependente. Os experimentos de competição de anticorpos com um conjunto de peptídeos resíduos superpostos identificaram o epítopo para o anticorpo monoclonal 3F6, o anticorpo monoclonal dirigido contra a gp82 que inibe a invasão celular, como a seqüência representada pelo peptídeo p3 (244 a 263), que tem superposição parcial com o sítio de adesão à célula

Niveles de anticuerpos anti-Gal en personas infectadas y no-infectadas por trypanosoma cruzi: probable inducción por bacterias y por el parásito / Anti-Gal antibodies levels in trypanosoma cruzi infected and non-infected persons: probable induction by bacteria and by the parasite

Se estudiaron los niveles de anticuerpos contra epítopes Gal Ó 1,3 Gal en 407 sueros humanos chagásicos (92) y no chagásicos (315), mediante la reacción de hemaglutinación con eritrocitos de conejo; con inmunoelectrotransferencia se investigó la reactividad de sueros con altos títulos de anticuerpos anti-Gal frente a antígenos de escherichia coli y serratia marcescens. Finalmente, utilizando un anticuerpo anti-Gal purificado se identificó epítopes Gal Ó 1,3 Gal en formas metacíclicas de 12 cepas altoandinas chilenas de trypanosoma cruzi. Entre los 92 sueros chagásicos, se demostró que en el 68,5 por ciento (63) de los menos chagásicos se detectó anticuerpos anti-Gal a títulos ò 1:1.600, mientras que entre los sueros no chagásicos, sólo el 15,6 por ciento (49) mostró respuesta anti-Gal a títulos similares. Estos datos sugieren que la determinación de estos anticuerpos podría contribuir a complementar el diagnóstico de la infección, especialmente cuando se establezcan títulos de corte ò 1:3.200. La inmunoelectrotransferencia mostró que sueros de personas infectadas con T. cruzi reconocen varios antígenos presentes en E. coli y S. marcescens, lo que refuerza la idea de que a lo menos en parte estas bacterias serían capaces de estimular estas respuestas. El análisis autorradiográfico utilizando anticuerpo anti-Gal purificado, mostró diferencias en la expresión de los epítopes Gal Ó 1,3 Gal en las diferentes cepas de T. cruzi. Estos resultados sugieren que los anticuerpos anti-Gal podrían tener real significado en los mecanismos de inmunidad natural y protección de la infección en chilenos infectados con T. cruzi